植物组织培养需要一定的场地、仪器设备，大致包括一系列实验室：如无菌室（接种的重要场所，面积不必很大，但必须保证密封和洁净）；化学实验室（是配制试剂和培养基的场所）；培养室（是试管苗的培养场所，内设培养架空调机等）；洗涤室（专门洗涤各种玻璃器皿的场所）；灭菌室（主要为培养基和玻璃器皿以及工具消毒灭菌的场所）和细胞学实验室（可以进行一系列的观察和分析等）。此外，还需要恒温箱、烘箱、冰箱、天平、酸度计、高压灭菌器、馏水发生器、显微镜等以及一些玻璃器皿（三角瓶、容量瓶、培养皿、烧杯、量筒等）。

培养条件因植物材料的不同而不同，但一般采用温度为25℃，光照强度22000勒克斯，每天照射8～10小时，培养基pH为5.0～6.5之间，但要根据实际情况另做调整。

植物组织培养一般方法？

植物组织培养可以分为四个阶段：

（1）建立无菌体系，即外植体及培养基的消毒、接种，获得愈伤组织或器官。

（2）进行增殖，不断分化产生新的植株，或直接产生不定芽及胚状体，也可以根据需要反复进行继代培养，以达到大量繁殖的目的。

（3）将植株转移进行生根培养，可以转入生根培养基，也可以直接切取进行扦插生根。

（4）试管苗过渡，即试管苗出瓶后进行一定时间对外界环境的适应过程。

一、培养材料的采集

组织培养所用的材料非常广泛,可采取根、茎、叶、花、芽和种子的子叶,有时也利用花粉粒和花药,其中根尖不易灭菌,一般很少采用.

对于木本花卉来说,阔叶树可在一、二年生的枝条上采集,针叶树种多采种子内的子叶或胚轴,草本植物多采集茎尖.

在快速繁殖中,很常用的培养材料是茎尖,通常切块在0.5厘米左右,如果为培养无病毒苗而采用的培养材料通常仅取茎尖的分生组织部分,其长度在0.1毫米以下.

二、培养材料的消毒

（一）先将材料用流水冲洗干净,很后一遍用蒸馏水冲洗,再用无菌纱布或吸水纸将材料上的水分吸干,并用消毒刀片切成小块.

（二）在无菌坏境中将材料放入70％洒精中浸泡30－60秒.

（三）再将材料移入漂白粉的饱和液或0.01％升汞水中消毒10分钟.

（四）取出后用无菌水冲洗三、四次.

三、制备外植体

将已消毒的材料,用无菌刀、剪、镊等,在无菌的环境下,剥去芽的鳞片、嫩枝的外皮和种皮胚乳等,叶片则不需剥皮.然后切成0.2－0.5厘米厚的小片,这就是外植体.在操作中严禁用手触动材料.

四、接种和培养

（一）接种

在无菌坏境下,将切好的外植体立即接在培养基上,每瓶接种4－10个.

（二）封口

接种后,瓶、管用无菌药棉或盖封口,培养皿用无菌胶带封口.

（三）温度

培养基大多应保持在25℃左右,但要因花卉种类及材料部位的不同而区别对待.

（四）增殖

外植体的增殖是组培的关键阶段,在新梢等形成后为了扩大繁殖系数,需要继代培养.把材料分株或切段转入增殖培养基中,增殖培养基一般在分化培养基上加以改良,以利于增殖率的提高.增殖1个月左右后,可视情况进行再增殖.

（五）根的诱导

继代培养形成的不定芽和侧芽等一般没有根,必须转到生根培养基上进行生根培养.1个月后即可获得键壮根系.

五、组培苗的练苗移栽

试管苗从无菌到光、温、湿稳定的环境进入自然环境,必须进行炼苗.一般移植前,先将培养容器打开,于室内自然光照下放3天,然后取出小苗,用自来水把根系上的营养基冲洗干净,再栽入已准备好的基质中,基质使用前很好消毒.移栽前要适当遮荫,加强水分管理,保持较高的空气湿度（相对湿度98％左右）,但基质不宜过湿,以防烂苗.

*一步，将采来的植物材料除去不用的部分，将需要的部分仔细洗干净，如用适当的刷子等刷洗。把材料切割成适当大小，即灭菌容器能放入为宜。置自来水龙头下流水冲洗几分钟至数小时，冲洗时间视材料清洁程度而宜。易漂浮或细小的材料，可装入纱布袋内冲洗。流水冲洗在污染严重时特别有用。洗时可加入洗衣粉清洗，然后再用自来水冲净洗衣粉水。洗衣粉可除去轻度附着在植物表面的污物，除去脂质性的物质，便于灭菌液的直接接触。当然，很理想的清洗物质是表面活性物质—吐温。 第二步是对材料的表面浸润灭菌。要在超净台或接种箱内完成，准备好消毒的烧杯、玻璃棒、70%酒精、消毒液、无菌水、手表等。用70%酒精浸10～30秒。由于酒精具有使植物材料表面被浸湿的作用，加之70%酒精穿透力强，也很易杀伤植物细胞，所以浸润时间不能过长。有一些特殊的材料，如果实、花蕾、包有苞片、苞叶等的孕穗，多层鳞片的休眠芽等等，以及主要取用内部的材料，则可只用70%酒精处理稍长的时间。处理完的材料在无菌条件下，待酒精蒸发后再剥除外层，取用内部材料。 第三步是用灭菌剂处理。表面灭菌剂的种类较多，可根据情况选取1—2种使用见表。第四步是用无菌水涮洗，涮洗要每次3min左右，视采用的消毒液种类，涮洗3-l0次左右。无菌水涮洗作用是免除消毒剂杀伤植物细胞的副作用注意：①酒精渗透性强，幼嫩材料易在酒精中失绿，所以浸泡时间要短，防止酒精杀死植物细胞。②老熟材料，特别是种子等可以在酒精中浸泡时间长一些，如种子可以浸泡5分钟。③升汞的渗透力弱，一般浸泡10分钟左右，对植物材料的杀伤力不大。④漂白粉容易导致植物材料失绿，所以对于幼嫩材料要慎用。⑤在消毒液中加入浓度为0.08—0.12%的吐温20或80（一种湿润剂），可以降低植物材料表面的张力，达到更好的消毒效果。

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