酶活力测定的方式方法有哪些
测定酶活力,可用物理法,化学法或酶分析法等方法。常用的方法有:*一,在适当的条件下,把酶和底物混合,测定生成一定量产物所需的时间,此即终点法。第二,将酶和底物混合后隔一定时间,间断地或连续地测定反应的连续变化,如吸收度的增加或减少。
第 三,将酶与底物混合后,让其反应一定时间,然后停止反应,定量测定底物减少或产物生成的量。后两种方法称为动力学法或反应速率法:按取样及检测的方式可称为取样测定法或连续测定法。
(1)定时法:(两点法)
通过测定酶反应开始后某一时间段内(t1到t2)产物或底物浓度的总变化量来求取酶反应初速度的方法。其中t1往往取反应开始的时间。
酶与底物在一定温度下作用一段固定的时间,通过加入强酸、强碱、蛋白医学教育网整理沉淀剂等,使反应完全停止(也叫中止反应法)。加入试剂进入化学反应呈色测出底物和产物的变化。
该法很基本的一点是停止反应后才测定底物或物的变化。
优点:简单易行,对试剂要求不高。
缺点:难保证测定结果的真实性。
难以确定反应时间段酶促反应是否处于线性期。随着保温时间的延续,酶变性失活加速。
(2)连续监测法:
又称为动力学法或速率法、连续反应法。
在酶反应过程中,用仪器监测某一反应产物或底物浓度随时间的变化所发生的改变,通过计算求出酶反应初速度。
连续监测法根据连续测得的数据,可选择线性期的底物或产物变化速率用于计算酶活力。
因此连续监测法测定酶活性比定时法更准确。
实际工作中,采用工具酶的酶偶联法已经成为医学教育网整理应用很广、很频繁测酶活性浓度的方法。
(3)平衡法:
通过测定酶反应开始至反应达到平衡时产物或底物浓度总变化量来求出酶活力的方法,又叫终点法。
酶活性测定方法
酶活性测定方法可采用定时法、连续监测法和平衡法。
1.定时法通过测定酶反应开始后某一时间段内(t1到t2)产物或底物浓度的总变化量来求取酶反应初速度的方法。
2.连续监测法是在酶反应过程中,用仪器监测某一反应产物或底物浓度随时间的变化所发生的改变,通过计算求出酶反应初速度。
3.平衡法是通过测定酶反应开始至反应达到平衡时产物或底物浓度总变化量来求出酶活力的方法,又叫终点法。
酶活性也叫酶的活力,是指酶催化一定化学反应的能力。酶活力的大小或活性的高低,可以用在一定条件下,催化某种化学反应的转化速率来表示,也就是酶催化的转化速率越快酶的活力就越高,反之,速率越慢,酶的活性就越低。
植物酶活性分析检测
植物体中的酶影响着植物细胞的生长、分裂、分化,并能决定植物的生根、发芽、开花、结实、休眠、脱落等。植物酶对植物的生长发育有重要的调节控制作用。卡文思检测提供了科学的实验技术及专业的实验操作,主要针对氧化还原酶、蛋白酶、裂解酶、转移酶、异构酶等检测。对于多种酶共同的检测效率更高。
一、检测指标
二、应用领域
1、植物的生长发育和器官建成研究
2、植物抗衰老研究
3、非生物胁迫(抗盐、抗旱、抗寒)研究
4、植物遗传育种研究
5、植物氧胁迫的耐受性研究
三、已检样本
水稻根系和叶片;黄瓜;小麦;苹果叶片;水稻;萝卜叶片;藻类;棉花等。
四、检测方法介绍——MDA风光光度计法介绍
MDA是膜脂过氧化很重要的产物之一,它的产生还能加剧膜的损伤因此在植物衰老生理和抗性生理研究中MDA含量是一个常用指标,可通过MDA了解膜脂过氧化的程度,以间接测定膜系统受损程度以及植物的抗逆性。在酸性和高温度条件下,MDA可以与硫代巴比妥酸(TBA)反应生成红棕色的产物,其很大吸收波长在532nm。且植物组 织中蔗糖与TBA显色反应产物的很大吸收波长在450nm,但532nm处也有吸收。测定时需去除这部分干扰,从而准确计算出样本中丙二醛的含量。
1 、操作:
依次加入100μL样本和标准品于试管中,在加入300μL试剂一,95℃沸水浴20min,离心取200ul上清液于96孔板,450nm,532nm,600nm处分别读数。
2 、仪器和试剂:
离心机、组织破碎仪、计时器、移液器,96孔板,酶标仪(450nm、532nm、600nm),混匀器、水、沸水锅、离心机
急!请问哪位大神知道测定植物apx酶活时,怎么测定酶液
1. 酶液制备 取1.0g植物叶片剪碎,按1∶3(W/V)加入预冷的50mmol/L K2HPO4-KH2PO4缓冲液进行研磨提取,用2层纱布过滤,滤液离心(4000×g)10min,上清液作酶粗提液供测定。
2. 酶活性测定 3ml反应混合液中含50mmol/L K2HPO4-KH2PO4缓冲液(pH7.0),0.1mmol/L EDTA-Na2,0.3mmol/L AsA,0.06mmol/L H2O2和0.1ml酶液。加入H2O2后立即在20℃下测定10~30秒内的A290变化,计算单位时间内AsA减少量及酶活性。
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